|
|
Микробиологическое исследование кефира
20.2. Санитарно-микробиологическое исследование кисломолочных продуктов
Общим признаком всех кисломолочных продуктов является молочнокислое брожение, вызванное молочнокислыми бактериями. Микроорганизмы выделяют фермент лактазу, расщепляющую дисахарид лактозу на 2 молекулы моносахаридов: глюкозу и галактозу.
С12Н22О11+Н2О С6Н12О6+С6Н12О6 4С3Н6О3
лактоза глюкоза галактоза молочная кислота
Таким образом из одной молекулы сахара лактозы образуются четыре молекулы молочной кислоты. Молоко скисает, а содержащийся в нем казеин свертывается и образует сгусток.
В некоторых кисломолочных продуктах наряду с молочнокислым брожением протекает и спиртовое брожение. Поэтому различают:
1. Продукты молочнокислого брожения: сметана, простокваша, ацидофильное молоко.
2. Продукты смешанного (молочнокислого и спиртового) брожения: кумыс, кефир, катык и др.
Технология приготовления кисломолочных продуктов сводится к следующему: После пастеризации молоко охлаждают до температуры сквашивания. В зависимости от вида приготовляемого продукта применяют различные температуры сквашивания:
- для термофильных микроорганизмов – 40-42°С;
- для мезофильных микроорганизмов – 30-35°С.
Для получения кисломолочного продукта желательной консистенции с выраженным вкусом и ароматом необходима хорошая закваска. На молочных заводах применяют закваски, состоящие из чистой культуры молочнокислых бактерий.
1. Молочнокислый стрептококк – Str. lactis, Str. cremoris Str. diacetylactis Str. thermophilus;
2. Молочнокислые палочки – L. bulgaricum, L. acidophilus .
Для каждого кисломолочного продукта применяется специфическая закваска. Различие между ними заключается в том, что в каждой закваске находится один или несколько видов микробов, которые, развиваясь в продукте, придают ему нужные, характерные свойства.
Чистоту закваски, а также соотношение между ее компонентами, проверяют ежедневно путем приготовления окрашенных препаратов и их микроскопией.
Ацидофильное молоко относится к продуктам молочнокислого брожения.
Ацидофильная палочка в отличие от других молочнокислых бактерий хорошо приживается в желудочно-кишечном тракте. Это объясняется тем, что ацидофильные бактерии относятся к постоянным обитателям желудочно-кишечного тракта молодняка, находящегося на молочном вскармливании. При переходе на смешанное кормление ацидофильная палочка заменяется другими микроорганизмами. Ацидофильная палочка образует больше молочной кислоты, антибиотических веществ, чем другие молочнокислые бактерии, которые губительно действуют на гнилостные, болезнетворные виды бактерий. Поэтому рекомендуют использовать ацидофильные препараты для профилактики и лечения болезней молодняка, а также для ускорения восстановления полезной микрофлоры кишечника, при дисбактериозах.
Специально для нужд животноводства ветеринарные лаборатории выпускают ацидофильные препараты АБК (ацидофильно-бульонная культура) и ПАБК (пропионово-ацидофильная бульонная культура).
В пастеризованное молоко (обрат) вносят 3-5% закваски, содержащей чистую культуру L. acidophilus, перемешивают и ставят в термостат при 40-42ºС, сгусток образуется через 6-8 ч – он должен иметь однородную, тягучую консистенцию.
При микроскопии ацидофильного молока в поле зрения обнаруживают крупные палочки, Грам+, расположенные одиночно или в виде коротких цепочек (рис. 57).
Сметана. В пастеризованные при 85- 90°С сливки вносят 0,5-3% лабораторной закваски, состоящей из Str. lactis или Str. cremoris. Заквашивание происходит при 30°С в течение 8-12 ч.
При микроскопии сметаны в поле зрения должны быть видны молочнокислые стрептококки, расположенные парно или в виде коротких цепочек (рис. 58).
Рис. 57. Микроскопия в препарате, приготовленном из ацидофильного молока
Рис. 58. Микроскопия в препарате, приготовленном из сметаны
Кефир – кисломолочный продукт смешанного брожения, для приготовления которого используют кефирные грибки. Кефирные грибки имеют определенную структуру и ведут себя биологически как живой саморегулирующийся организм: они растут, делятся и обладают наследственностью.
При гистологическом исследовании срезов видны переплетения нитей, которые образуют строму грибка, удерживающую остальную группу микроорганизмов:
1. Мезофильные молочнокислые стрептококки (Str. lactis, Str. cremoris).
2. Мезофильные молочнокислые палочки (Веtа- и Streptobacterium).
3. Термофильные молочнокислые палочки (L. casei).
4. Молочные дрожжи прочно связаны со стромой гриба.
Молочнокислые бактерии, гидролизуя лактозу, снабжают молочные дрожжи кислотой, необходимой им для жизнедеятельности, а дрожжи, вызывая спиртовое брожение, насыщают продукт углекислотой, что придает кефиру особый вкус.
Методика приготовления грибковой кефирной закваски: в пастеризованное молоко вносят кефирные зерна в соотношении 1:20, оптимальная температура 15-22°С в течение 14-16 ч. Затем закваску процеживают через сито и используют как производственную закваску для приготовления кефира.
Качество закваски ежедневно проверяют, определяют активность (время сквашивания, кислотность), наличие посторонней микрофлоры путем просмотра микроскопического препарата в 10 полях зрения микроскопа (рис. 59), качество сгустка, вкус и запах.
Кумыс — кисломолочный напиток, готовят из кобыльего молока, которое резко отличается от коровьего по химическому составу (жира 1,5-2,0 %, сахара 6,0% и высокое содержание альбумина).
В молоке кобылиц преобладает альбумин, который при воздействии молочной кислоты образует рыхлый, неплотный сгусток с мелкими хлопьями, поэтому сквашенное кобылье молоко остается жидким.
Рис. 59 1 – микрокартина в препарате, приготовленном из кефира, 2 – кефирные зерна
Кумыс, как и кефир, является продуктом смешанного брожения, причем главную роль играет спиртовое брожение (от 1,0 до 2,5% спирта).
Кобылье молоко необходимо получать с особым соблюдением всех санитарно-гигиенических требований, так как кобылье молоко нельзя пастеризовать. При пастеризации оно свертывается, поэтому закваску вносят в парное молоко, состоящую из болгарской молочнокислой палочки и дрожжей рода Torula (рис.60).
Сквашивание происходит при 26°С в течение 6-8 ч.
В домашних условиях в кобылье молоко вносят в качестве закваски кумыс прежней выработки.
Рис. 60. Микрокартина в препарате, приготовленном из кумыса
Задания для самостоятельно работы
1. Провести постановку редуктазной пробы молока различной бактериальной загрязненности. Дать оценку качества различным пробам молока по этому показателю.
2. Провести определение ингибиторов в различных пробах молока. Дать оценку качества различным пробам молока по этому показателю.
3. Определить общее микробное число сырого и пастеризованного молока методом посева на питательные среды.
4. Изучить морфологические особенности бактерий молочнокислых продуктов, микрокартину зарисовать.
Вопросы для самоподготовки и контроля знаний
1. Назвать санитарно-бактериологические показатели, используемые для оценки качества молока.
2. Какими методами исследуют молоко на редуктазу, на обнаружение антибиотиков, значение этих показателей при оценке качества молока.
3. С какой целью проводят пастеризацию молока?
4. Как определяют общее микробное число и коли-титр молока?
5. Какие методы используют для санитарно-микробиологического исследования молочнокислых продуктов для оценки их качества?
9 Доказательная польза кефира для здоровья
Кефир - это самая популярная среди любителей здорового образа жизни.
Богатый питательными веществами и пробиотиками, он очень полезен для пищеварения и здоровья кишечника.
Многие считают его полезнее йогурта.
Вот 9 преимуществ кефира для здоровья, подтвержденные исследованиями.
Кефир - это кисломолочный напиток, который традиционно готовят из коровьего или козьего молока.
Получается путем добавления кефирных зерен в молоко.Это не зерна злаков, а зерноподобные колонии дрожжей и молочнокислых бактерий, которые по внешнему виду напоминают цветную капусту.
В течение примерно 24 часов микроорганизмы в кефирных зернах размножаются и сбраживают сахара в молоке, превращая его в кефир.
Затем зерна удаляются из жидкости и могут использоваться снова.
Другими словами, кефир - это напиток, а зерна кефира - это закваска, которую вы используете для приготовления напитка.
Кефир родом из некоторых регионов Восточной Европы и Юго-Западной Азии.Название происходит от турецкого слова keyif , что означает «хорошее самочувствие» после еды (1).
Молочнокислые бактерии зерна превращают лактозу в молочную кислоту, поэтому кефир имеет кислый вкус, как йогурт, но имеет более жидкую консистенцию.
Порция нежирного кефира на 6 унций (175 мл) содержит (2):
- Белок: 4 грамма
- Кальций: 10% от RDI
- Фосфор: 15% от RDI
- Витамин B12: 12% от RDI
- Рибофлавин (B2): 10% от RDI
- Магний: 3% от RDI
- Достаточное количество витамина D
Кроме того, в кефире около 100 калорий, 7–8 граммов углеводов и 3–6 граммов жира, в зависимости от типа используемого молока.
Кефир также содержит широкий спектр биоактивных соединений, включая органические кислоты и пептиды, которые способствуют его пользе для здоровья (1).
Безмолочные версии кефира могут быть приготовлены из кокосовой воды, кокосового молока или других сладких жидкостей. Они не будут иметь такой же профиль питательных веществ, как кефир на молочной основе.
Краткое описание Кефир - кисломолочный напиток, полученный из зерен кефира. Это богатый источник кальция, белка и витаминов группы В.
Некоторые микроорганизмы могут оказывать благотворное влияние на здоровье при приеме внутрь (3).
Известные как пробиотики, эти микроорганизмы могут влиять на здоровье различными способами, помогая пищеварению, регулированию веса и психическому здоровью (4, 5, 6).
Йогурт - самая известная пробиотическая пища в западной диете, но на самом деле кефир - гораздо более мощный источник.
Зерна кефира содержат до 61 штамма бактерий и дрожжей, что делает их очень богатым и разнообразным источником пробиотиков, хотя разнообразие может варьироваться (7).
Прочие кисломолочные продукты изготавливаются из гораздо меньшего количества штаммов и не содержат дрожжей.
Резюме Кефир может содержать до 61 различных микроорганизмов, что делает его гораздо более мощным источником пробиотиков, чем многие другие кисломолочные продукты.
Считается, что некоторые пробиотики в кефире защищают от инфекций.
Сюда входит пробиотик Lactobacillus kefiri , который является уникальным для кефира.
Исследования показывают, что этот пробиотик может подавлять рост различных вредных бактерий, включая Salmonella , Helicobacter pylori и E.coli (8, 9).
Кефиран, один из углеводов, содержащихся в кефире, также обладает антибактериальными свойствами (10).
Резюме Кефир содержит пробиотик Lactobacillus kefiri и углеводный кефиран, которые защищают от вредных бактерий.
Остеопороз характеризуется разрушением костной ткани и является серьезной проблемой в западных странах.
Это особенно распространено среди пожилых женщин и значительно повышает риск переломов.
Обеспечение адекватного потребления кальция - один из наиболее эффективных способов улучшить здоровье костей и замедлить прогрессирование остеопороза (11).
Полножирный кефир - это не только отличный источник кальция, но и витамин К2, который играет центральную роль в метаболизме кальция. Было показано, что добавление K2 снижает риск переломов на 81% (12, 13).
Недавние исследования на животных связывают кефир с повышенным всасыванием кальция в костных клетках. Это приводит к повышению плотности костей, что должно помочь предотвратить переломы (14).
Резюме Кефир из молочных продуктов является отличным источником кальция, а жирный молочный кефир также содержит витамин K2. Эти питательные вещества очень полезны для здоровья костей.
Рак - одна из основных причин смерти в мире.
Это происходит, когда аномальные клетки в вашем теле бесконтрольно растут, например, в опухоли.
Считается, что пробиотики в ферментированных молочных продуктах уменьшают рост опухоли, стимулируя вашу иммунную систему. Следовательно, возможно, что кефир может бороться с раком (15).
Эта защитная роль была продемонстрирована в нескольких исследованиях в пробирках (16, 17).
Одно исследование показало, что экстракт кефира снижает количество клеток рака груди человека на 56% по сравнению с 14% для экстракта йогурта (18).
Имейте в виду, что прежде чем можно будет сделать твердые выводы, необходимы исследования на людях.
Резюме Некоторые исследования в пробирках и на животных показывают, что кефир может подавлять рост раковых клеток. Однако в настоящее время исследований на людях нет.
Пробиотики, такие как кефир, могут помочь восстановить баланс полезных бактерий в кишечнике.
Вот почему они очень эффективны при лечении многих форм диареи (19, 20).
Более того, есть множество доказательств того, что пробиотики и пробиотические продукты могут облегчить многие проблемы с пищеварением (5).
К ним относятся синдром раздраженного кишечника (СРК), язвы, вызванные инфекцией H. pylori и многие другие (21, 22, 23, 24).
По этой причине кефир может быть полезен при проблемах с пищеварением.
Резюме Пробиотики, такие как кефир, могут лечить несколько форм диареи. Они также могут улучшить состояние при различных заболеваниях пищеварительной системы.
Обычные молочные продукты содержат натуральный сахар, называемый лактозой.
Многие люди, особенно взрослые, не могут правильно расщеплять и переваривать лактозу. Это состояние называется непереносимостью лактозы (25).
Молочнокислые бактерии в ферментированных молочных продуктах, таких как кефир и йогурт, превращают лактозу в молочную кислоту, поэтому эти продукты содержат гораздо меньше лактозы, чем молоко.
Они также содержат ферменты, которые способствуют дальнейшему расщеплению лактозы.
Таким образом, люди с непереносимостью лактозы обычно хорошо переносят кефир, по крайней мере, по сравнению с обычным молоком (26).
Имейте в виду, что можно приготовить кефир, на 100% не содержащий лактозы, используя кокосовую воду, фруктовый сок или другой немолочный напиток.
Резюме Кефир имеет низкое содержание лактозы, поскольку содержащиеся в нем молочнокислые бактерии уже предварительно переварили лактозу.Люди с непереносимостью лактозы часто могут без проблем пить кефир.
Аллергические реакции вызваны воспалительными реакциями на определенные продукты или вещества.
Люди с сверхчувствительной иммунной системой более склонны к аллергии, которая может спровоцировать такие состояния, как астма.
В исследованиях на животных было показано, что кефир подавляет воспалительные реакции, связанные с аллергией и астмой (27, 28).
Для лучшего изучения этих эффектов необходимы исследования на людях.
Резюме Ограниченные данные исследований на животных показывают, что употребление кефира может уменьшить аллергические реакции.
Если вы не уверены в качестве покупного кефира, вы можете легко приготовить его дома.
Кефир в сочетании со свежими фруктами делает вкусный и полезный десерт.
Зерна кефира доступны в некоторых магазинах здорового питания и супермаркетах, а также в Интернете.
Вы также можете найти множество сообщений в блогах и видео, в которых рассказывается о производстве кефира, но процесс очень прост:
- Положите 1–2 столовые ложки (14–28 граммов) кефира в небольшую банку.Чем больше вы используете, тем быстрее он будет культивироваться.
- Добавьте около 2 стаканов (500 мл) молока, желательно органического или даже сырого. Молоко коров, выращенных травой, очень полезно для здоровья. Оставьте 1 дюйм (2,5 см) наверху банки.
- Можно добавить жирные сливки, если хотите более густой кефир.
- Закройте крышку и оставьте на 12–36 часов при комнатной температуре. Вот и все.
Готово, когда оно начинает выглядеть комковатым. После того, как вы аккуратно процедите жидкость, остаются оригинальные крупинки кефира.
Теперь вы можете положить зерна в новую банку с молоком, и процесс начнется заново.
Он вкусный, питательный и экологически чистый.
Магазин кефирных круп здесь.
Краткое описание Домашний кефир легко приготовить из кефирных зерен и молока.
Кефир - это здоровый ферментированный продукт, по консистенции сопоставимый с питьевым йогуртом.
Этот продукт традиционно готовят из молочного молока, но существует множество немолочных вариантов.
Исследования показывают, что он укрепляет вашу иммунную систему, помогает при проблемах с пищеварением, улучшает здоровье костей и может даже бороться с раком.
Начните с кефира сегодня, чтобы получить максимум удовольствия от этого вкусного кислого напитка.
.Питательный состав и польза для здоровья кефирных зерен
Референтный номер: 145
Год: 2017
Авторы: Дамиана Д. Роза *, Маноэла М.С. Диас, Шукаш М. Гжесковяк, Сандра А. Рейс, Лизиан Л. Консейсау и Мария ду Карму Г. Пелузио
Ссылка: Ссылка на оригинал статьи
Здоровье : Артериальное давление | Рак
Питание : Антиоксиданты
Включения : Кефир
Резюме
Резюме
Кефир - это ферментированное молоко, произведенное из зерен, которые содержат специфическую и сложную смесь бактерий и дрожжей, которые живут в симбиотической ассоциации.Питательный состав кефира варьируется в зависимости от состава молока, микробиологического состава используемых зерен, времени / температуры ферментации и условий хранения. Кефир родом с Кавказа и Тибета. В последнее время кефир вызвал интерес в научном сообществе из-за его многочисленных положительных эффектов на здоровье. В настоящее время несколько научных исследований подтвердили пользу кефира для здоровья, как исторически сообщалось, как пробиотический напиток с большим потенциалом для укрепления здоровья, а также как безопасный и недорогой продукт, который легко приготовить в домашних условиях.Регулярное потребление кефира было связано с улучшением пищеварения и толерантности к лактозе, антибактериальным эффектом, гипохолестеринемическим эффектом, контролем уровня глюкозы в плазме, антигипертензивным эффектом, противовоспалительным эффектом, антиоксидантной активностью, антиканцерогенной активностью, антиаллергенной активностью и заживлением. последствия. Большая часть исследований, подтверждающих эти результаты, была проведена in vitro или на животных моделях. Однако необходимы систематические клинические испытания, чтобы лучше понять эффекты регулярного употребления кефира как части диеты и их влияние на профилактику заболеваний.Таким образом, в настоящем обзоре основное внимание уделяется питательному и микробиологическому составу кефира и представлены соответствующие результаты, связанные с благоприятным воздействием кефира на здоровье человека и животных.
ЗНАЧЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
В настоящем обзоре основное внимание уделяется питательному и микробиологическому составу кефира и представлены соответствующие результаты, связанные с благотворным воздействием кефира на здоровье человека и животных. Польза кефира для здоровья варьируется от его пробиотического потенциала, способствующего улучшению пищеварения и толерантности к лактозе, антибактериальному эффекту, гипохолестеринемическому эффекту, контролю уровня глюкозы в плазме, антигипертензивному эффекту, противовоспалительному эффекту, антиоксидантной активности, антиканцерогенной активности и противовоспалительному эффекту. аллергенная активность.В школе закваски кефирные зерна (как молочные, так и водяные кефирные зерна) используются для приготовления освежающих пробиотических напитков, которые подают вместе с нашим свежеиспеченным пребиотическим хлебом, богатым клетчаткой.
См. Наш онлайн-курс обучения на сайте The Sourdough Club
.Влияние Lactobacillus kefiri, полученного на основе кефира, на иммунный ответ слизистых оболочек и кишечную микробиоту
Оценка воздействия пробиотиков на здоровье хозяина может помочь понять, как их можно использовать для профилактики заболеваний. На основании наших предыдущих исследований и анализов in vitro на PBMC и репортерной системе Caco-2 ccl20: luc, представленных в этой работе, был отобран штамм Lactobacillus kefiri CIDCA 8348, который вводили здоровым швейцарским мышам ежедневно в течение 21 дня.Лечение пробиотиками увеличивало уровень IgA в кале и снижало экспрессию провоспалительных медиаторов в пейеровских бляшках и мезентериальных лимфатических узлах, где также повышалось содержание IL-10. В подвздошной кишке были активированы гены IL-10, CXCL-1 и муцина 6; тем временем в толстой кишке индуцировался муцин 4, тогда как гены IFN- γ , GM-CSF и IL-1 β подавляли. Более того, эксплантаты подвздошной и толстой кишки показали противовоспалительный эффект L. kefiri , поскольку индуцированное LPS увеличение уровней IL-6 и GM-CSF у контрольных мышей было значительно ослаблено у L.kefiri мышей. Что касается фекальной микробиоты, профили DGGE позволили разделить экспериментальные группы на два отдельных кластера. Количественный ПЦР-анализ различных групп бактерий выявил только значительные изменения в популяции Lactobacillus . В заключение, L. kefiri является хорошим кандидатом для использования при воспалительных заболеваниях кишечника.
1. Введение
Взаимодействия между комменсальными бактериями, кишечным эпителием и иммунными клетками играют решающую роль в поддержании гомеостаза кишечника [1, 2].Распознавание микробов через рецепторы распознавания образов индуцирует экспрессию и высвобождение многих различных иммунных медиаторов, таких как хемокины и про- или противовоспалительные цитокины, которые вносят вклад в организацию как врожденного, так и адаптивного иммунного ответа [3, 4]. Использование пробиотиков для модуляции иммунных ответов на слизистых и на системном уровне представляет собой очень интересную альтернативу в отношении профилактики и лечения инфекционных заболеваний [5, 6] и различных иммунопатологий, таких как воспалительные заболевания кишечника и аллергии [7–9] или нарушения обмена веществ [ 10, 11].
Зерна кефира состоят из сложной симбиотической микробиоты, и из них получают кисломолочное молоко под названием «кефир» [12]. Некоторые полезные свойства, такие как иммунологические, противомикробные, противоопухолевые и гипохолестеринемические свойства, были связаны с потреблением кефира [13-17], и изучение полезных свойств, приписываемых изолированным кефиром микроорганизмам, представляет собой область большого интереса для разработки функционального питания.
Сообщалось о иммуномодулирующих свойствах различных дрожжей и бактерий, выделенных из кефирных зерен.Среди кефирных дрожжей Kluyveromyces marxianus CIDCA 8154 и Saccharomyces cerevisiae CIDCA 8112 подавляют врожденный ответ кишечного эпителия посредством механизма, зависящего от модуляции NF-kB [18]. В случае молочнокислых бактерий, полученных из кефира, было доказано, что L. kefiranofaciens уменьшает колит на мышиной модели, вызванной DSS [19], и оказывает противоастматический эффект у мышей с аллергической астмой на овальбумин [20]. С другой стороны, Кэри и Костшинска [21] показали, что L.kefiri ослабляет провоспалительный ответ в эпителиальных клетках кишечника, вызванный Salmonella Typhimurium и Hong et al. [22] показали его влияние на продукцию Th2 и провоспалительных цитокинов на макрофагах.
Одной из самых важных лактобацилл, получаемых из кефира, является Lactobacillus kefiri [23–26]. В предыдущих исследованиях наша рабочая группа продемонстрировала, что продукты секреции и поверхностные белки из L. kefiri оказывают защитное действие против инвазии Salmonella enterica serovar Enteritidis в клетки Caco-2 [27], а также против цитотоксических эффектов клостридиальных клеток. токсины на клетках Vero [28].Более того, было доказано, что штаммов L. kefiri безопасны [29] и прилипают к желудочно-кишечной слизи [30]. С другой стороны, штаммов L. kefiri сохраняют высокий процент жизнеспособности как после сушки распылением [31, 32], так и сублимационной сушки [33]. Все указанные свойства показывают потенциальные возможности L. kefiri как пробиотического микроорганизма.
Изучение механизмов, лежащих в основе действия пробиотиков на хозяина при непатологических состояниях, может быть полезным для оценки безопасности и дальнейшего применения полезных микроорганизмов для профилактики и лечения различных заболеваний.Принимая во внимание потенциальную возможность L. kefiri как нового пробиотика, мы предлагаем оценить иммуномодулирующие свойства выделенных кефиром штаммов L. kefiri с помощью тестов in vitro и in vivo , наряду с изменениями в кишечнике. состав микробиоты, индуцированный введением L. kefiri .
2. Материалы и методы
2.1. Бактериальные штаммы и условия роста
Lactobacillus kefiri CIDCA 83111, 83113, 83115, 8321, 8325, 8345 и 8348 были выделены из зерен кефира [12]. L. kefiri JCM 5818 был получен из Японской коллекции микроорганизмов (Рейкен, Япония). Ранее L. kefiri CIDCA 83115, 8321, 8345 и 8348 были охарактеризованы как агрегирующие штаммы; Между тем L. kefiri CIDCA 83111, 83113 и JCM 5818 были описаны как неагрегативные штаммы [34]. Лактобациллы культивировали в MRS-бульоне (DIFCO, Детройт, США) при 37 ° C в течение 48 ч в аэробных условиях. Замороженные исходные культуры хранили при -80 ° C в обезжиренном молоке до использования.
2.2. Анализ стимуляции с помощью Caco-2 ccl20: luc Reporter System
Эксперименты проводили, как описано ранее [35]. Вкратце, клетки Caco-2, стабильно трансфицированные конструкцией люциферазного репортера под контролем промотора CCL20 (Caco-2 ccl20: luc) [36], сокультивировали в течение 2 часов с суспензией штаммов L. kefiri (10 7 КОЕ на лунку) для тестирования (кратность инкубации = 100). Затем клетки стимулировали флагеллином из Salmonella enterica ser.Typhimurium (FliC) (1 μ г · мл -1 ) в течение 6 часов. Люциферазную активность измеряли на люминометре Labsystems Luminoskan TL Plus (Thermo Scientific, США) с использованием системы анализа люциферазы (Promega, Madison, WI, США). Люминесценцию нормализовали и выражали как процент от среднего значения стимулированного контроля (NAL).
2.3. Эксперименты по стимулированию PBMC
Образцы периферической крови, предварительно протестированные на отсутствие ВИЧ или вирусных инфекций гепатита, были получены от здоровых добровольцев (EFS Aquitaine, Bordeaux Blood Bank).Человеческие PBMC выделяли центрифугированием в градиентах Ficoll-Hypaque. После промывания 2 × 10 6 клеток / лунку культивировали в 12-луночных планшетах в среде RPMI-1640 с добавлением 2 г л -1 NaHCO 3 , 300 мг л -1 L-глутамина, 100 мкг г / мл -1 стрептомицина, 100 МЕ / мл -1 пенициллина (Sigma Chemical Co., Сент-Луис, Миссури, США) и 10% FBS.
Эксперименты по стимуляции L. kefiri на PBMC были выполнены при совместном культивировании 2 × 10 7 бактерий на лунку () в течение 24 часов при 37 ° C в атмосфере 95% воздуха и 5% CO 2 .Супернатанты культур собирали и хранили при -80 ° C до анализа цитокинов. Опыты реализованы в трех экземплярах. Жизнеспособность клеток не изменилась после 24 часов совпадения с бактериями (данные не показаны).
2.4. Количественная оценка уровней цитокинов в супернатантах культур
Профили цитокинов анализировали после стимуляции PBMC штаммом L. kefiri с использованием набора Human Th2 / Th3 11plex FlowCytomix (eBioscience). Он был разработан для измерения человеческого IFN-, γ , IL-1 β , IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, p70, TNF- α и TNF- β .Анализ выполняли на проточном цитометре BD Accuri C6 (BD Biosciences). TGF- β измеряли с использованием прибора eBioscience TGF beta 1 человека / мыши Ready-SET-Go! Набор для ELISA (минимальная определяемая концентрация 8,0 пг / мл).
2,5. Мыши
Самцов мышей-альбиносов Swiss, 4-недельного возраста (Janvier, Le Genest St Isle, Франция) помещали на карантин через 2 недели после прибытия и содержали в стандартных лабораторных условиях со свободным доступом к пище и воде. Температуру поддерживали на уровне 22 ° C и выдерживали 12-часовой режим свет / темнота.Все процедуры выполнялись в соответствии с руководящими принципами местного комитета по этике и в строгом соответствии с директивами Европейского экономического сообщества «86/609». Мышей случайным образом разделили на две группы (
.[PDF] Микробиологическое исследование молочнокислых бактерий в зернах кефира культурально-зависимыми и культурально-независимыми методами.
@article {Chen2008MicrobiologicalSO, title = {Микробиологическое исследование молочнокислых бактерий в зернах кефира культурально-зависимыми и культурально-независимыми методами.}, author = {Си-Чиа Чен, Шэн-Яо Ван и М. Чен}, journal = {Пищевая микробиология}, год = {2008}, объем = {25 3}, pages = { 492-501 } } Ключевой метод Молочнокислые бактерии (LAB) в различных исходных зернах кефира сначала оценивали с помощью денатурирующего гель-электрофореза в градиенте полимеразной цепной реакции (ПЦР-DGGE) культурально-зависимым способом и дополнительно подтверждали методами секвенирования ДНК. Результаты показали, что комбинированный метод культивирования с помощью ПЦР-DGGE и последующего секвенирования ДНК может успешно идентифицировать четыре штамма LAB из трех зерен кефира из Тайваня (названных Синьчу, Монголия и Илан). Lactobacillus kefiri учтены… Развернуть Аннотация Сохранить в библиотеку
Создать оповещение
Ссылка
Запустить канал исследований
.
